技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES對樣品的測定,在選擇方法時,可以優(yōu)先選擇標準方法、我國國家標準方法。對于非標準方法、超出預定范圍使用的標準方法,擴充和修改過的標準方法都需要對方法進行驗證,既進行方法性能檢驗,證明所選方法符合分析要求、切實可行,滿足客戶要求。
然而,怎么做方法驗證
1 方法驗證內(nèi)容
方法驗證內(nèi)容主要有標準曲線、檢出限、定量限、精密度和準確度。
1.1 標準曲線
采用儀器對方法進行檢驗時,首先要建立樣品和儀器之間的關(guān)系。通常采用標準曲線來表示,利用不少于5點(不包括原點)的實驗數(shù)據(jù)算出待測物和儀器響應值之間的線性回歸方程并計算相關(guān)系數(shù)(r):以待測物的量(如ng)或濃度(如ng/mL)為橫坐標,響應值(吸光度或熒光強度)為縱坐標制作標準曲線,確定線性范圍,線性相關(guān)系數(shù)應該大于0.9990。實驗室要求原子吸收火焰法r>0.9990,石墨爐法r>0.9950,原子熒光光度法r>0.9990。
在做方法驗證之前,我們首先得知道樣品中重金屬元素的限度(如水產(chǎn)及水產(chǎn)制品中鉛的限度為0.5mg/kg),根據(jù)樣品的性質(zhì)及儀器的靈敏度等因素,然后確定線性范圍,線性范圍中Zui高點的標液濃度一般是重金屬元素的限度濃度的1~2倍,這是比較關(guān)鍵的一步。例子:稱0.5g水產(chǎn)及水產(chǎn)制品經(jīng)微波消解、趕酸處理后,轉(zhuǎn)移定容到25mL容量瓶中,如果樣品中鉛的含量為鉛的*0.5mg/kg,那么樣品中的濃度為10ng/mL,設(shè)定標液曲線范圍的Zui高點濃度為20ug/mL,由于大部分樣品的含量都在鉛的*0.5mg/kg以下,所以按照稱樣量為0.5g,定容到25mL,線性范圍為0~25ng/mL是比較合適的。
標準曲線配制步驟(以鉛標準曲線配制方法為例):
(1)精密吸取單元素標準鉛溶液液(1.0mg/mL,國家標準物質(zhì)中心,批號GBW08619)1.0mL,置100mL量瓶中,加硝酸(0.5mol/L)至刻度,混勻,得到10ug/mL鉛標準儲備液;
(2)再精密吸取上述標準儲備液0.5mL,置200mL量瓶中,加硝酸(0.5mol/L)至刻度,混勻,得到25ng/mL鉛標準使用液。用石墨爐自動進樣器自動稀釋成每1mL含2.5、5.0、10.0、15.0、25.0ng鉛并繪制標準曲線,或根據(jù)試樣中鉛含量稀釋成適當?shù)臐舛忍荻裙┰游辗止夤舛扔嫓y定。
(3)將標準工作液導入原子吸收分光光度計,用超純水調(diào)零,在283.3nm波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線(儀器可以自動進行繪制標準曲線)。
1.1.1 標準曲線配置注意事項
(1)先要確定標準曲線的范圍,可以從重金屬的限值入手,GB 2762-2012食品安全國家標準 食品中污染物*,多種食品中鉛的限值如下:
食品類別(名稱) | 限值(mg/kg) | 取樣量(g) | 稀釋倍數(shù)(mL) | 樣品中的濃度(ng/mL) |
食用油 | 0.1 | 0.5 | 10 | 5 |
膨化食品 | 0.5 | 0.25 | 25 | 10 |
蛋 | 0.2 | 0.5 | 10 | 10 |
醋 | 1.0 | 0.5 | 50 | 10 |
冷凍飲品 | 0.3 | 0.5 | 10 | 15 |
水產(chǎn)及水產(chǎn)制品 | 0.5 | 0.5 | 25 | 10 |
果蔬汁 | 0.05 | 1 | 10 | 5 |
蔬菜制品 | 1.0 | 0.5 | 50 | 10 |
糖果 | 0.5 | 0.5 | 50 | 5 |
然后調(diào)整稱樣量,如果按照飲料中鉛Zui
大限值0.05mg/kg,稱取1g飲料樣品,處理后定容到10mL,那么樣品溶液濃度為5ng/mL,由于大部分飲料含重金屬的量都要比限值低,所以要靈活調(diào)整標準曲線的范圍,或者稱樣量的大小。
(2)要考慮儀器測量該金屬元素的靈敏度,如果測量該元素的靈敏度低,可以適當?shù)脑黾臃Q樣量,減少定容體積,增大標準曲線溶液的濃度。相反,如果該元素的靈敏度高,要相對減少稱樣量,增大定容體積,必要的時候進行稀釋。
(3)如果樣品含量較高(需要經(jīng)驗),在稱樣時和定容時應該考慮Zui好使樣品溶液的濃度落在標準曲線的1/3~2/3的濃度范圍,在這個范圍時,測量的準確性和精密度相對較高。
(4)配制標準曲線時,盡可能使用校正過的移液槍、移液管、容量瓶,標準溶液中間儲備液在配制好后放置一段時間(一般為10~20min),再稀釋成標準曲線系列工作溶液。
(5)在稀釋標準溶液,配制標準系列時,一般使用同一個移液槍或者刻度移液管進行稀釋,保證相同的偏差,有利于配制出相關(guān)系數(shù)較好的標準系列工作液。
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